1、使用新鮮潔凈的水與乙腈。沖洗系統，確保系統干凈，不含任何緩沖鹽和污染物。

　　2、取用色譜柱時避免磕碰掉落。

　　3、將丁基疏水色譜柱入口端連接到系統上，柱出口端先不要連接，色譜柱身上有箭頭標明正確流向。

　　4、在0.1mL/min流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱，然后在2分鐘內將流速升至0.5mL/min。

　　5、當溶劑均勻的從柱出口端流出，停流速，將色譜柱出口端接到系統檢測器上（這樣可以避免氣泡進入檢測系統，并且可快速達到基線平衡）。

　　6、重啟流速，按照步驟4的方法逐漸提高流速，至常規分析時所使用的流速。

　　7、參考柱效測試報告中的方法，使用該流動相條件平衡色譜柱，通常需要使用5-10倍柱體積的流動相，直至壓力與基線穩定。

　　8、測試丁基疏水色譜柱柱效。如果沒有柱效測試報告中的分析物，請廠家部門尋求支持，使用合適的濃度與進樣量。柱效結果略低于柱效測試報告屬正常情況。如結果明顯偏低、峰形拖尾，提示色譜柱和/或所使用的液相系統處于非理想狀態，需要進行故障排查。當使用2.1mm內徑色譜柱時，建議優化系統以減少譜帶展寬，包括：使用檢測器微量流通池，減少進樣器loop環體積，使用較小內徑（如0.005''或0.12mm）的系統管路。并確保管路與丁基疏水色譜柱連接恰當、無死體積。當使用小顆粒填料（如2.5μm）短柱進行快速分離時，需要考慮以下因素：

　　1、確保管路丁基疏水色譜柱連接恰當、無死體積，盡量優化系統減少譜帶展寬；

　　2、提高采樣頻率至10點/秒以上；

　　3、較小粒徑的色譜柱產生的柱壓較高，而較小粒徑要達到*色譜效率所需的線速度較高，請根據所用LC系統的實際情況調節流速；

　　4、可使用較高的柱溫來補償小顆粒造成的壓力升高，例如40?C。使用雜化顆粒反相色譜柱時，可使用45?C或更高。